Dustin Lee Hoffman klasszikus jazzt tanult. Eleinte zenész szeretett volna lenni, de később meggondolta magát, és a színészetet választotta, ez követően Los Angelesből New Yorkba költözött. Ötödik alkalomra vették fel Lee Strasberg híres színésziskolájába. Közben alkalmi munkákból tartotta el magát, volt ápoló egy pszichiátriai intézetben, pincér, mosogatófiú, portás és bárzongorista is. Barátjánál, Gene Hackmannél lakott, mindketten Marlon Brando nagy csodálói voltak. A színházi szereplései nyitották meg az utat előtte a filmipar felé. 1967-ben debütált a Diploma előtt című filmben, amiért Oscar-díjra is jelölték. Legsikeresebb filmjei: Éjféli cowboy (1969 – Oscar-díjra jelölték), Kis nagy ember (1970), Szalmakutyák (1971), Pillangó (1973), Lenny (1974 – Oscar-díjra jelölték), Az elnök emberei (1976), Maraton életre-halálra (1976), Aranyoskám (1982 – Oscar-díjra jelölték), Amikor a farok csóválja... (1997 – Oscar-díjra jelölték). 1980-ban kapott először Oscar-díjat az 1979-ben bemutatott Kramer kontra Kramer című filmben nyújtott emlékezetese alakításáért. Az 1985-ös Az ügynök halála című filmért elnyerte a Golden-Globe-díjat is. Második Oscar-díját az 1989-es Családi ügy című filmben nyújtott alakításáért kapta. Dustin Hoffmann híres arról, hogy a nagyon alaposan és a részletekre odafigyelve készül szerepeire, többek közt ennek is köszönhető, hogy generációjának egyik legjobb színészeként tartja számon a szakma.